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月季耐逆分子育种研究思维导图

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月季耐逆分子育种研究

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思维导图大纲

月季耐逆分子育种研究思维导图模板大纲

4 基因重组技术

基于长引物PCR的分子重组

三条引物和两轮 PCR;本质就是用一条含目的突变的寡聚核昔酸引物进行基因内的剪接

长引物PCR的应用

基因内的片段剪除

RNAi发夹结构的构建

同向串联基因序列的构建

1 导言

月季分子育种现状

花色、花型、花香、开花期、抗逆性

月季耐逆分子育种研究的意义

植被修复、生活品质、城市建设的需要

2 植物耐逆育种的分子机理

植物耐逆相关目的基因

干旱响应基因

细胞膜系统完整性保护相关基因

GSH基因、SOD基因等

增强细胞保水和吸水的能力的细胞渗调物质编码基因

小分子渗透调节物、多胺、 LEA蛋白、K通道蛋白、脱水素等

根系向水性响应基因

主要有木葡聚糖转葡糖酶编码基因

寒冷响应基因

调控基因

如CBF(C-repeat binding transcription factor)

保护基因

COR( cold-regulated gene)

植物耐逆的转录因子调控

转录因子的结构特征

DNA结合域

与DNA特定序列结合,控制目标基因的转录。

转录调控域

调节转录因子的活性和效力,与其他蛋白质相互作用影响基因表达。

寡聚化位点

促使转录因子形成多聚体,增强其功能和稳定性。

核定位信号

将转录因子定位到细胞核,参与基因调控过程。

与植物胁迫相关的转录因子

bZIP、Zinc finger 、MYB/MYC、NAC 、AP2/EREBP转录因子家族

植物DREB转录因子的研究进展

植物的干旱、高盐及低温胁迫应答途径涉及到依赖ABA 和不依赖ABA的信号传导途径

其中 DREB1 转录因子的主要成员 DREB1A/B/C和DREB2转录因子分别参与到不依赖于ABA的低温和脱水(干早或高盐)胁迫应答途径中

DREB1D/CBF4 参与到依赖ABA的脱水应答途径中。这些结果表明,植物在逆境胁迫应答反应中存在着复杂的信号传递途径,并且各种胁迫信号传递途径间通过某些共同的组分联系在一起,构成一个复杂的信号传递网络。

植物XET基因的研究进展

木葡聚糖转葡糖昔酶XET(Xyloglucan Endotransglycosylase)是细胞壁代谢的关键酶,有水解和形成糖昔键的双重功能。XET作用于次生壁形成初期以及次生壁和初生壁连接全过程,通过水解木萄聚糖促使细胞膨大和伸长,随后将水解的糖基连接成新的聚合体,使细胞壁结构很快变得坚固。因此,XET在细胞壁的重构中扮演重要角色。与植物细胞壁的重构、伸长和伸长停止机理密切相关,对植物生长调控具有重大意义

5 月季基因转化受体系统的优化

月季离体培养与植株再生

2,4-D、TDZ对月季伤形成和体发生的影响

3.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/LTDZ最先产生球形的原胚

胚性愈伤的保持与体胚发生

2,4-D和TDZ的EP培养基上长出的歧形胚多数会在后续培养中又膨大成愈伤

光照对月季再生的影响

红光最适宜中国月季子叶胚的形成

ABA对月季再生的影响

含ABA的培养上的愈伤保持持续胚胎发生的能力

月季不同类型体胚的植株再生

有2片子叶的体胚再生频率最高

月季体胚再生的进程

芽状胚和子叶胚都产生于球形胚,子叶胚再生时先膨大子叶,再分化出芽和根

月季转基因体系的优化

外植体

整叶(叶长0.5~0.8cm,带长约1mm 叶柄)带叶柄的整叶

培养基的pH

pH=4.5

抗生素

200mg/L Cef和25 mg/L G418

转化效率

5%

3 植物耐逆分子育种基本技术

分子育种的基本内涵

目的基因的分离与鉴定

根据基因的功能分离目的基因

根据mRNA特异性分离目的基因

根据 DNA的插入作用分离目的基因

植物表达载体构建

受体细胞培养

转基因技术

外源基因整合表达检测

转录水平上对特异mRNA的检测,如Northern 杂交、RT-PCR 等

翻译水平上对特异蛋白质的检测

生化反应检测法:主要通过酶反应来检测

免疫学检测法,如免疫沉淀法、酶联免疫吸附法(ELISA)及 Western 杂交

生物学活性的检测

耐逆相关基因克隆技术

耐逆相关基因的电子克隆

2005 年蒺藜苜蓿基因组数据公布,根据其EST中有DREB,XET基因等与耐早耐寒相关的信息,从蒺藜苜蓿中克隆这类耐逆相关基因并进行功能鉴定,获得有自主知识产权的基因,而且将这些基因用于月季等观赏植物的耐逆分子育种研究。

耐逆相关基因的实验室克隆及序列分析2

先根据基因的特性寒冷或干旱胁迫处理材料,诱导 RNA表达;再提取RNA,从 mRNA 克隆

目的基因的序列分析及功能预测

多序列比对、分子结构预测、进化树分析

目的基因功能鉴定技术

酵母单杂方法、过量表达、沉默

6 月季耐逆分子改良研究

单基因转化

月季DREBIC基因转化

双基因聚合转化

月季DREBIC/XET双基因聚合转化

多基因转化

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