转基因动物制备方法思维导图
转基因动物制备方法详解
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思维导图大纲
转基因动物制备方法思维导图模板大纲
利用DNA显微注射法
（1）外源基因准备
外源DNA纯化
整合率：线性DNA分子>环形
环形DNA分子在细胞内半衰期长（适用于瞬时表达与基因治疗）
尽量去除转基因结构中的载体部分
（2）原核期胚胎制备
促性腺激素诱导超数排卵，本交或子宫内受精，从输卵管壶腹部收集原核期受精卵培养。
（3）显微注射
倒置相差显微镜下
（4）显微注射后胚胎移植
移植原则
保证胚胎发育阶段与输卵管和子宫的生理状态同步，一般是囊胚期胚胎移植在子宫内，囊胚前移植在输卵管内。
胚胎干细胞移植法
胚胎干细胞（ESC)
从早期胚胎内细胞团(ICM)中分离出来的未分化，具有正常二倍体染色体和发育全能性的细胞。
诱导型多能干细胞(iPSC)
体外条件下利用四个转录因子组合处理分化的体细胞，使其重编程得到的类似胚胎干细胞的一种细胞类型。
当ESC或iPSC注入宿主囊胚腔内（内细胞团注射）可以同宿主胚胎共同发育，分化成成体动物的各种组织，形成嵌合体
可在体外人工培育，长期扩增和冷冻保存
步骤
（1）转基因胚胎干细胞（或iPSC）的获得
药物筛选
（2）囊胚转基因干细胞注射
（3）嵌合体的检测和育种
应选择具有同一性状两个明显不同的表现型的个体进行嵌合
转基因体细胞核移植法
动物克隆：通过核移植生产遗传基础相同动物个体的技术
胚胎克隆：使用的核供体细胞来自多细胞阶段的胚胎
细胞克隆：使用的核供体细胞来自于动物个体的体细胞
连续克隆：经过核移植而发育成的胚胎或动物个体的细胞再次作为核供体进行核移植
转基因体细胞克隆：利用转基因体细胞作为供体细胞所进行的核移植
不经过有性生殖
转基因体细胞准备
（1）体细胞选择与传代培养
（2）体细胞的转染与阳性细胞筛选
（3）体细胞克隆中的M2期卵母细胞主要作为细胞质供体
（4）移核，融合，激活与培养
供体细胞与受体细胞的核质同步化是影响移植效率的关键因素
（5）转基因克隆胚胎的移植
（6）转基因克隆个体的接产与护理
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