p38激活的蛋白激酶信号转导通路介导的自噬在镉暴露的韩国臂尾轮虫中的作用思维导图

自噬可能在氧化条件下发挥关键的防御作用，通过清除累积和受损或异常的物质，因为氧化应激会引发包括 DNA、蛋白质和脂质在内的生物分子的损伤

主要消化具有异常和/或不必要功能的蛋白质，以回收物质和节省能量。在营养饥饿、缺氧和内质网（ER）应激等刺激下，自噬机制也被诱导以维持体内平衡

自噬相关 ( ATG ) 基因

对B. koreanus LC3 和人类 LC3 进行比对，以分析 LC3 抗体 (Sigma-Aldrich) 的表位位点。

使用来自人类的相似基因序列作为查询，从B. koreanus的全基因组数据库（未发表数据；总支架编号 1087；总长度 110 Mb；N50 值 1.09 Mb）中鉴定了B. koreanus的 LC3 基因的氨基酸序列。使用完整组装的转录本针对 NCBI 的非冗余 (NR) 数据库进行本地 BLAST 搜索 (BLASTp)。E 值 ≤10 −5的 BLASTp 匹配被认为是有意义的。

雷帕霉素

bafilomycin A1

LC3 I/II 被检测为自噬的标志蛋白

吖啶橙 (AO)

中性红 (NR)

，根据实验将轮虫暴露于化学物质中，并用 4% 多聚甲醛固定 5 分钟。在 PBS-T 中清洗三次后，将固定的样品在封闭缓冲液（PBS-T 中的 0.5% BSA）中孵育 1 小时。将轮虫转移到一抗溶​​液（在封闭缓冲液中 1:500 稀释）中，在 4 °C 下孵育 48 小时 ，并在洗涤缓冲液中清洗三次，每次 1 小时。用 FITC 标记的山羊抗兔 IgG 抗体（Sigma-Aldrich；1:200 稀释的封闭缓冲液）替换洗涤缓冲液，并 在 4  °C 下孵育 24 小时。使用 FITC（488  nm/520 通过配备 20  × 镜头的共聚焦激光扫描显微镜对 100 nm 波长的样本进行分析。

轮虫首先在室温下 用 2.5% 戊二醛在 0.1 M 磷酸盐（pH 7.3）中固定 1小时。固定后，在 4 °C 黑暗条件下用 1% OsO4 加 1.5% 亚铁氰化钾在 0.1 M 磷酸盐缓冲液（pH 7.3）中处理组织 1小时，然后在乙醇和环氧丙烷系列中脱水后嵌入 Epon 812（电子显微镜科学；美国宾夕法尼亚州哈特菲尔德）。使用纯树脂在 70 °C 下进行聚合两天。使用超薄切片机（UltraCut-UCT，Leica，奥地利）获得超薄切片（70 nm），然后将其收集在 100 目铜网上。用 2% 醋酸铀酰（15分钟）和柠檬酸铅（5 分钟后，用 120 kV 透射电子显微镜 (Tecnai G2 Spirit Twin，赛默飞世尔科技，美国) 对切片进行检查。

细胞内 ROS 水平在 Cd 暴露后升高

LC3 I/II 水平在 Cd 暴露后以与 ROS 水平类似的方式增加

WB

p-p38 的磷酸化水平以剂量依赖性方式增加，而 ERK 和 JNK 未检测到显著的磷酸化

p38 抑制剂 SP203580 和 30 mg/L Cd 共同处理轮虫

MEK1/2抑制剂

jnk抑制剂sp600125

OS 清除剂存在下 p38 MAPK 的磷酸化状态

ROS 清除下的 LC3 I/II 免疫荧光

p38 抑制下的 LC3 I/II 免疫荧光