分析化学高效液相色谱中的速率理论思维导图

高效液相色谱的流动相是液体

液体与气体性质的差异是导致高效液相色谱的扩散和传质过程对柱效的影响与气相色谱有差别的主要原因

纵向扩散系数β=2γDm，在HPLC中，液体流动相粘度大，使Dm很小

因此只有在流速很低时才能观察到纵向扩散对柱效的影响

在常用色谱条件下，纵向扩散可以忽略，故流速升高， H总是升高

但升高速率比GC中慢，因此，为了快速分析，一般仍选择大于最佳流速的条件

化学键合相色谱法中，df可忽略，故固定相传质阻抗Cs可忽略

流动相传质阻抗Cm=ωmdp2/Dm中的ωm与柱内径、形状、填料性质等有关

但至今仍没确切的数值或关系,与GC中的Cs不同，Cm与保留因子无关

HPLC中还有一项静态流动相传质阻抗Csm，而且Cm和Csm都与固定相的粒度dp有关

小颗粒球形固定相，匀浆高压填充，降低涡流扩散

HPLC中的范第姆特方程为：H=A+Cmu+Csmu

固定相粒度对塔板高度的影响：dp变小，A、Cm和Csm均变小，而且塔板高度受流动相线速度的影响也越小

可见小粒度的填料比在GC中更为重要

根据速率理论，HPLC的实验条件应该是,小粒度、均匀的球形化学键合相

低粘度流动相，流速不宜快,柱温适当

键合相色谱法中流动相对分离的影响 根据分离方程式：n由固定相及色谱柱填充质量决定

α（即选择性）主要受溶剂种类的影响，k受溶剂配比的影响

溶剂的选择性：斯奈德（Snyder）根据溶剂的质子接受能力（Xe）、质子给予能力（Xd）和偶极作用力（Xn）

在反相键合相色谱中，常选用非极性键合相

非极性键合相可用于分离分子型化合物，也可用于分离离子型或可离子化的化合物

ODS是应用最广泛的非极性固定相。对于各种类型的化合物都有很强的适应能力

短链烷基键合相能用于极性化合物的分离

苯基键合相适用于分离芳香化合物以及多羟基化合物如黄酮苷类等

流动相一般以极性最强的水为基础溶剂，加入甲醇、乙腈等极性调节剂

极性调节剂的性质以及其与水的混合比例对溶质的保留值和分离选择性有显著影响

一般情况下，甲醇－水已能满足多数试样的分离要求，且粘度小、价格低

是反相键合相色谱法最常用的流动相。乙腈的溶剂强度较高，且粘度较小

其截止波长（190nm）比甲醇（205nm）的短，更适合于利用末端吸收进行检测

可选择弱酸（常用醋酸）、弱碱（常用氨水）或缓冲盐（常用磷酸盐及醋酸盐）作为抑制剂，调节流动相的pH

抑制组分的离解，增强保留,调节流动相的离子强度也能改善分离效果

在流动相中加入0.1%～1%的醋酸盐、磷酸盐等,可减弱固定相表面残余硅醇基的干扰作用，减少峰的拖尾，改善分离效果