分析化学反相键合相色谱法思维导图

输液泵

检测器：有紫外、荧光、电化学和蒸发光散射检测器等

原理是朗伯－比尔（Lambert-Beer）定律；适用于有紫外吸收的组分

二极管阵列检测器：可获得三维光谱－色谱图，同时提供定性定量信息

荧光检测器：原理是荧光强度与组分的浓度成线性关系

电化学检测器：原理是当组分经过电极表面时，发生氧化还原反应

产生电量（Q）的大小符合法拉第定律：Q=nFN

蒸发光散射检测器：散射光的强度（I）与气溶胶中组分的质量（m）有下述关系： I=kmb或lgI=blgm+lgk

以极性键合相为固定相，如氰基（－CN）、氨基（－NH2）或二羟基键合相等

以非极性或弱极性溶剂，如烷烃，加适量极性调整剂，如醇类作流动相

正相键合相色谱主要用于分离溶于有机溶剂的中等极性的分子型化合物

分离选择性决定于键合相的种类、流动相的强度和试样的性质

极性强的组分的保留因子k大，后洗脱出柱。流动相的极性增强，洗脱能力增加，使组分k减小，tR减小

溶质与键合极性基团间的作用力，如氢键、诱导或静电作用等，是决定色谱保留和分离选择性的首要因素

流动相的选择性是通过其与试样分子间的相互作用来实现的，分子间作用力不同，则分离的选择性不同

同系物，如甲醇与丙醇，作用力类型相同，其色谱分离的选择性相似，如果换成高偶极矩溶剂二氯甲烷，则选择性将发生变化

在现代色谱学中，反相键合相色谱法一般就称为反相色谱法,这是本章要掌握的重点

反相色谱法通常以非极性键合相为固定相，以极性溶剂及其混合物为流动相

固定相的极性比流动相的极性弱；能分离极性范围很宽的试样

键合相的烷基链长和含碳量是影响溶质的保留因子（及柱效）、选择性和载样量的重要因素

溶质的极性越弱，其疏水（疏溶剂）性越强，k越大，tR也越大

增加流动相中水的含量，则溶剂强度降低，使溶质的k增大

流动相的pH变化会改变溶质的离解程度，溶质的离解程度越高，k值越小

因此，常加入少量弱酸、弱碱或缓冲溶液，调节流动相的pH

抑制有机弱酸、弱碱的离解,增加它与固定相的疏水缔合作用，以达到分离的目的

这种色谱方法又称为离子抑制色谱法

固定相键合烷基的碳链延长，硅胶表面键合烷基的浓度越大，溶质的k越大

把离子对试剂加入到含水流动相中，与组分离子生成中性离子对

从而增加溶质与非极性固定相的作用，使分配系数增加，改善分离效果

用于分离可离子化或离子型的有机酸、碱、盐等

影响容量因子的因素有离子对试剂的种类和浓度、流动相的pH和流动相中有机溶剂的种类和比例等

使用过程中不流失,化学稳定性好

适于梯度洗脱,载样量大

使用一般化学键合相时流动相中水相的pH应维持在2～8

以免引起硅胶溶解，但目前已有许多键合相能够承受更宽的pH范围