核酸的理化性质详解
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核酸的理化性质思维导图模板大纲
物理性质
核酸为多元酸,具有较强的酸性
DNA为线型高分子,粘度较大
DNA为白色纤维状固体,RNA为白色粉末,微溶于水,不溶于一般有机溶剂
化学性质
核酸可被酸碱或酶水解成各种组分,用层析,电泳等方法分离,其水解程度因条件而异
RNA能在室温下被稀碱水解成核苷酸,而DNA对碱较稳定,常用此性质测定RNA的碱基组成或除去溶液中的RNA杂质
嘌呤和嘧啶都含有共轭双键
中性最大吸收值在260nm附近
以A260=1.0为标准定量核酸
利用A260/A280判断核酸样品程度
碱基对间的氢键(维持横向稳定)
碱基堆积力(维持纵向稳定)
环境中的正离子
概念:在某些理化因素的作用下,DNA双键间氢键断裂,空间结构遭到破坏,形成单链无视线团状态的过程
因素
加热
PH值
有机溶剂
本质
双键间氢键断裂
变性后特点
出现增色反应
粘度下降
浮力密度升高
生物活性改变或丧失
概念:在适当条件下变性DNA的两条互补链重新缔合成双螺旋的过程
条件
一定的离子强度(削弱两链上磷酸基团的斥力)
较高温度(避免氢键随机形成,必须形成有效的氢键,才能维持其稳定性)
因素
复性的温度Tm=25℃是比较合适的温度
DNA单链片段的浓度
DNA单链片段的长度
DNA单链片段的复杂度
溶液离子的强度:维持一定的离子强度
概念:值亲缘关系相近的不同来源的DNA单链之间,或DNA单链与RNA单链之间通过碱基互补形成杂交分子的过程。
核酸的沉淀
在酚/Cl仿抽取以后,水相中的核酸可在一定盐浓度下,使用2.5~3倍体积的无水乙醇于低温下进行沉淀。
纯化方法
离心法
电泳法
色谱法
应用
研究DNA分子中某一种基因的位置
确定两种核酸分子间的序列相似性
检测某一些专一序列在待测样品中是否存在,使基因芯片的基础
用于疾病诊断
紫外吸收光谱法
定磷法
定糖法
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